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实用的猪人工授精实验室操作规程

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公猪站精液质量好坏直接与猪场情期受胎率、产仔数相关,所以再怎么强调精液的重要性都不为过。那么公猪站标准化操作究竟应该如何做?广东温氏这方面的操作规范可以给我们启示。

1、配制0.9% 盐水

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称9克氯化钠放入盐水瓶,加蒸馏水达1000ml,紧塞瓶口后,放进蒸锅消毒,开水蒸煮30分钟,冷却后即可使用。0.9%等渗生理盐水是用来清洗各类与精液直接接触的器皿。此盐水的浓度与精液渗透压相近,不会引起精虫的死亡,如用蒸馏水,将使精虫致死。

一、目的

2、玫瑰红染色液配制

规范公猪站按照严格的操作规程进行精液生产,减少次品精液的发生率,确保人工授精所用精液的质量得到保证。

称3克玫瑰红,加入99ml蒸馏水,用玻璃棒搅匀后,再加1ml40%福尔马林。此稀释剂用于对精虫进行染色,以便于检查异常的精子。

二、范围

3、稀释液配制

适用于各公猪站与猪场实验室。

精液稀释液是与新鲜精液渗透压接近,用于扩大精液容量,给精子提供营养、中和精子代谢产物、保持精液PH值的生理溶液。

三、职责

4、采精量测定

1、 采精员负责采精公猪的调教和采精工作。

按照规范的采精操作,公猪的采精量一般在100~500ml,平均220ml。每头公猪的采精量应相对比较稳定。如果公猪的采精量超出正常范围,
或与以往采精量明显不同,应注意查找原因。公猪精液的比重约为1.02克/ml,接近于1,因此,适合用称重的方法来测量采精量。每克重量精液的体积约为1ml。

2、
有公猪站的实验室负责公猪站所在猪场所有公猪的精液品质检查;各猪场实验室负责生产线公猪的精液品质检查。

实用的猪人工授精实验室操作规程。5、精液稀释与保存

3、 实验室操作人员负责配制稀释液和精液的稀释工作。

精液的稀释

4、 公猪站实验室负责精液的分装与保存;

精液稀释时,一定要强调原精液与稀释液的温度要尽量一致,温度相差在2℃以内。根据计算所得的稀释后总精液体积,缓缓加入稀释液,稀释液加入应沿着杯壁倒入,禁止将稀释液从高处倒入,形成冲击力。稀释液的最终加入量应使精液和稀释液的总体积达到所计算的稀释后体积。加入稀释液过程中,应一边加入稀释液,一边轻轻摇动烧杯或用洁净的玻璃棒搅拌。

5、 精液车司机负责精液的运输;

精液的分装

6、 各猪场实验室负责精液到场后的贮存。

精液稀释5分钟后,应再一次检查精子活力,如果活力没有下降,方可进行分装。调好精液分装机,以每80~100ml为单位,将精液分装至精液瓶或袋。实验室室温最好控制在20~25℃,以免在精液稀释分装处理过程中,
精液受到环境温度的影响。空气中的氧气不利于精子的保存,因此,精液封装时应尽可能将其中存留的空气排出。

四、工作程序

精液瓶在拧上盖子时,先将瓶盖旋大半圈左右,然后挤压瓶体使精液液面上升至瓶口,再旋紧,以排出瓶中空气。袋装精液在封口时,也应先将其中的空气挤压,使精液面上升到接近封口处的高度,再用热封口机热封。

采精公猪的调教

精液的保存

1、
后备公猪在7.5月龄开始采精调教。先调教性欲旺盛的公猪,下一头隔栏观察、学习。

A、保存温度:稀释好的精液应保存在有报警装置的电子恒温箱中,恒温箱内温度保持在16~18℃;

2、 挤出包皮积尿,清洗公猪的后腹部及包皮部,按摩公猪的包皮部。

B、每隔12个小时轻轻翻动一次,防止精子沉淀而引起死亡;

3、
诱发爬跨:用发情母猪的尿或阴道分泌物涂在假母猪上,同时模仿母猪叫声,也可以用其他公猪的尿或口水涂在假母猪上,目的都是诱发公猪的爬跨欲。

C、稀释的精液可在保温箱内保存约3天。超过3天的精液,质量将开始下降,不能用于人工授精;

4、
上述方法都不奏效时,可赶来一头发情母猪,让公猪空爬几次,在公猪很兴奋时赶走发情母猪,万不得已时采取强制将公猪抬上假台畜的方法。

D、输精前作精液检查:向试管倒入1~2ml精液,把试管放在37~38℃的恒温水浴箱中加温5分钟,取出精液轻轻摇匀,用已灭菌的滴管取1滴放于预热的载玻片,置于37℃的恒温板上片刻,用显微镜检查活力,精液活力≥
0.7,方可使用。

5、 公猪爬上假母猪后即可进行采精。

6、精液的运输

6、
对于难调教的公猪,可实行多次短暂训练,每周4~5次,每次15~20分钟,调教成功以后,每天采一次,连采3次,如果公猪的性欲很好,调教以后7天采一次;公猪性欲一般,则调教成功后2-3天采一次,连采3次。如果公猪表现任何厌烦、受挫或失去兴趣,应该立即停止调教训练。

精液运输应置于保温箱内,保持在16~18℃,运输过程中避免强烈震动。

7、
注意:在公猪很兴奋时,要注意公猪和采精员自己的安全,采精栏必须设有安全角。无论哪种调教方法,公猪爬跨后一定要进行采精,不然,公猪很容易对爬跨假母猪失去兴趣。调教时,不能让两头或以上公猪同时在一起,以免引起公猪打架等,影响调教的进行和造成不必要的经济损失。

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采精

1、
采精杯的制备:先在保温杯内衬一只一次性食品袋,再在杯口覆一层过滤纸,用橡皮筋固定,要松一些,使其能沉入2cm左右。制好后放在37°C恒温箱备用。为了保证采精杯内的实际温度,采精杯盖与杯分开放在恒温箱内。

2、 在采精之前先剪去公猪包皮上的被毛,防止干扰采精及细菌污染。

3、
将待采精公猪赶至采精栏,挤出包皮积尿,用0.1%KMnO4溶液清洗腹部及包皮部。

4、
用清水洗净,抹干。按摩公猪的包皮部,待公猪爬上假母猪后,用温暖清洁的手握紧伸出的龟头,顺公猪前冲时将阴茎的”S”状弯曲拉直,握紧阴茎螺旋部的第一和第二摺,在公猪前冲时允许阴茎自然伸展,不必强拉。充分伸展后,阴茎将停止推进,达到强直“锁定”状态,开始射精。射精过程中不要松手,否则压力减轻将导致射精中断。(注意在采精时不要碰阴茎体,否则阴茎将迅速缩回。)

5、
有乳白色浓份精液出现时开始收集,直至公猪射精完毕时才放手,注意在收集精液过程中防止包皮部液体或其他如雨水等进入采精杯。

6、 下班之前彻底清洗采精栏。

7、
采精频率:后备公猪调教合格后,采精间隔天数为7天;然后每3个月,对供精份数每次在平均份数以上的公猪的采精间隔减少1天,采精间隔天数最低不少于3天。

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精液品质检查

整个检查过程要迅速、准确,一般在5分钟内完成,以免时间过长影响精子的活力。精液质量检查的主要指标有:精液量、颜色、气味、精子密度、精子活力、畸形精子率等。检查结束后应立即填写《公猪精液品质检查记录表》,每头公猪应有完善的《公猪精检档案》。

1、
精液量:后备公猪的射精量一般为150~200毫升,成年公猪为200~600毫升,称重量算体积,1克计为1毫升。

2、
颜色:正常精液的颜色为乳白色或灰白色。如果精液颜色有异常,则说明精液不纯或公猪有生殖道病变,凡发现颜色有异常的精液,均应弃去不用。同时,对公猪进行检查,然后对症处理、治疗。

3、
气味:正常的公猪精液具有其特有的微腥味,无腐败恶臭气味。有特殊臭味的精液一般混有尿液或其它异物,一旦发现,不应留用。并检查采精时是否有失误,以便下次纠正做法。

4、
密度:指每毫升精液中含有的精子数,它是用来确定精液稀释倍数的重要依据。正常公猪的精子密度为2.0~3.0亿/毫升,有的高达5.0亿个精子/毫升。检查精子密度的方法常用以下两种:

精子密度仪测量法:它极为方便,检查时间短,准确率高。若用国产分光光度计改装,也较为适用。该法有一缺点,就是会将精液中的异物按精子来计算,应予以重视。

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红细胞计数法:该法最准确,但速度慢,其具体操作步骤为:

用不同的微量取样器分别取具有代表性的原精100微升和3%的KCl溶液900微升,混匀。在计数板的计数室上放一盖玻片,取少量上述混合精液放入计数板槽中。在高倍显微下计数5个中方格内精子的总数,将该数乘以50万即得原精液的精子密度。

5、 精子活力

每次采精后及使用精液前,都要进行活力的检查,检查精子活力前必须使用37℃左右的保温板预热:一般先将载玻片放在38℃保温板上预热2至3分钟,再滴上1小滴精液,盖上盖玻片,然后在显微镜下进行观察。保存后的精液在精检时要先在玻片预热2分钟。

精子活力一般采用10级制,即在显微镜下观察一个视野内作直线运动的精子数,若有90%的精子呈直线运动则其活力为0.9;有80%呈直线运动,则活力为0.8;依次类推。新鲜精液的精子活力以高于0.7为正常,稀释后的精液;当活力低于0.6时,则弃去不用。

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